Pruebas para detectar la infección por VIH

Ensayos serológicos

No se desarrollan anticuerpos anti-HIV hasta después de la declinación en la viremia de HIV y pueden ser detectadas por primera vez dentro de las 2 a 8 semanas después de la infección. Por lo tanto, los ensayos serológicos generalmente no son útiles para diagnosticar infección por HIV aguda o primaria. Los anticuerpos persistentes indetectables más de 3 meses después de la infección son raros, y las comunicaciones iniciales de pacientes infectados por HIV serológicamente negativos por mucho tiempo no han sido confirmadas.
Por lo general, la seroconversión comienza con una respuesta de la inmunoglobulina M (IgM) contra las proteínas Gag, con un cambio de los anticuerpos de tipo IgM por los IgG que ocurre en un período de 1 a 24 semanas.LA respuesta por IgM se superpone al período virémico y ses seguida de una respuesta por IgG en 5-7 días.La mayoría de los estudios comunicaron que las respuestas de IgG a las proteínas p24 y gp120 se desarrollan primero, seguidas por anticuerpos anti gp41 y contra las proteínas virales con masas musculares entre 50 y 60 KD. La elevación en los anticuerpos anti p24 coincide con una declinación en el antígeno p24 detectable. Por lo general, los títulos de anticuerpos IgG aumenta en los primeros meses después de la infección y luego se estabilizan. En una etapa más avanzada de la infección, los títulos de anticuerpos anti p24 pueden declinar por un aumento del antígeno p24; los anticuerpos contra otras proteínas virales, generalmente, persisten toda la vida.
En los adultos, las pruebas para anticuerpos anti HIV son consideradas positivas cuando un enzimoinmunoanálisis (ELISA) varias veces reactivo es confirmado madiante un ensayo más específico, como Western blot. Por lo general, se debe considerar que este hallazgo indica la infección actual por HIV. Una excepción a esta regla es un voluntario que ha recibido una vacuna experimental contra el HIV; en una sesión ulterior, se comenta con más detalle una análisis del enfoque para diagnosticar infecciones por HIV en esto individuos. Además, debido a transferencia pasiva de anticuerpos maternos, las pruebas serológicas no son útiles para diagnosticar infecciones por HIV en neonatos o lactantes de una madre infectada por HIV.

Enzimoinmunoanálisis

El enfoque primario para investigar la infección por HIV establecida en los adultos comprende el uso de ELISA para la detección de anticuerpos. La mayoría de los procedimientos aprobados utilizan antígenos de HIV inmovilizados para fijar los anticuerpos IgG en muestra del paciente. Los anticuerpos anti HIV ligados forman complejos con anti-IgG humana marcada con enzima y son detectados en una reacción clorimétrica. El cambio de color resultante es cualificado mediante espectrofotometría y es proporcional a la concentración de anticuerpos en muestra original. Se determina un corte de absorbancia para cada ensayo sobre la base de muestras control positivas y negativas estandarizadas. Estos ensayos utilizaban originariamente lisados de virus enteros como antígenos. El uso ulterior de proteínas virales recombinantes y péptidos ha conducido a una mayor sensibilidad y mejor especificidad. Las Infecciones por cepas no subtipo B pueden ser pasadas por alto, debido a una mejor afinidad de los anticuerpos por los antígenos que habitualmente están incluidos en estos ensayos. La inclusión de antígenos del grupo O en ELISA desde 1994 ha aumentado la sensibilidad para detectar infección por cepas variantes, aunque la heterogeniedad pronunciada entre las cepas del grupo O continúa produciendo algunas reacciones falsas negativas. Los ELISA que utilizan antígenos peptídicos parecen ser menos sensibles para detectar cepas del grupo O que los que utilizan proteínas virales.
En general, la sensibilidad de los ELISA varía del 93 al 100%; la sensibilidad comunicada para las pruebas autorizada bajo condiciones experimentales óptimas es mayor del 99%. Se pueden presentar resultados falsos negativos de los ELISA durante la infección pro HIV primaria, en los paciente inmunosuprimidos (incluidos algunos pacientes con SIDA en estado avanzado), y con errores en el rotulado o la manipulación de las muestras. Además, los ELISA para HIV-1 son relativamente poco sensibles para la infección por HIV-2; las tasas de reactividad con sueros de pacientes con infección por HIV-2 documentada varían del 60 al 90%. El agregado de antígenos de HIV-2 reconbinantes ha conducido a ELISA que son sensibles para detectar ambos retrovirus.
La especificidad de un ELISA repetidamente reactivo es alrededor del 99%. Las causas de ELISA falsos positivos son erró humano, hemodiálisis, una prueba de reaginas plasmáticas rápidas reactivas y problemas médicos simultáneos, como trastornos autoinmunes, mieloma múltiple, hemofilia y hepatitis alcohólica. Debido a las implicaciones clínicas de un resultado falso positivo del ELISA, las recomendaciones actuales para el diagnostico serológico de infección por HIV incluye un ELISA varias reacciones confirmando por un segundo ensayo. El segundo ensayo es más comúnmente un Western blot (véase mas adelante), aunque la Organización Mundial de la Salud ha declarado que se puede obtener una sensibilidad y una especificidad equivalentes cuando se realiza el diagnóstico utilizando dos ELISA que contiene antígenos diferentes y se basan en diferentes principios de ensayos. Este último enfoque puede ser más eficaz con relación al costo para los paciesen vías de desarrollo.
Tambien, en las Estados Unidos se comercializa un ELISA rápido para detectar anticuerpos anti HIV (Single Use Diagnostic System o SUDS. Murex Diagnóstics). Se agrega suero o plasma del paciente a una mezcla de cuentas de látex revestidas con antígeno del HIV-1. Los resultados positivos deben ser confirmados con otra prueba, como un Western blot, pero los resultados negativos se obtienen en un periodo de 10 a 15 minutos. Este ELISA rápido parece sumamente sensible y especifico mç, aunque puede haber resultados falsos positivos con una centrifugación insuficiente o con problemas en el procedimiento de las muestras.
La modificación del ensayo ELISA y Western blot estándar han conducido a pruebas que pueden detectar con exactitud los anticuerpos anti HIV en saliva, lo que obvia la necesidad de la Flebotomía. Estas pruebas en saliva parecen tener sensibilidades y especificidades similares a las de las pruebas practicadas en suero o plasma.

Western blot

El ensayo más utilizado para confirmar la reactividad del método ELISA es el Western blot. Esta prueba comprende la incubación del suero del paciente con una tira de microcelulosa sobre la cual se ha colocado proteínas virales que han sido separadas mediante electroforesis. Los anticuerpos humanos dirigidos contra proteínas especificas del HIV pueden ser identificados mediante la unión de anti-IgG humana ligada a la enzima, como en el método ELISA. Los Centres for Disease Control and Prevention y la Associatio of State and Territoial Piblic Health Laboratory Director define a un Western blot positivo como la presencia de dos de las bandas p24, g41 y gp120/160. La ausencia de cualquier banda reactiva es considerada como un resultado negativo. Un Western blot con bandas reactivas que no cumplen los criterios para una prueba positiva se denomina indeterminado.
El Western blot puede detectar confiablemente anticuerpos contra cepas subtipo B del HIV-1, aunque es menos sensible que el Elisa durante las primeras etapas de la seroconversión. Los ensayos comerciales no incluyen las proteínas del grupo O y pueden omitir infecciones por cepas no subtipo B de HIV-1. Aproximadamente el 20% de los sueros HIV-2 positivo pueden dar resultados negativos con Western blot, y alrededor del 10% de los sueros de grupo O HIV-1 son negativos por este método.
Se han comunicado resultados falsos positivos con el Western blot en pacientes con hiperbilirrubinemia, trastornos del tejido conectivo y gammopatías policlonales. Los estudios de donantes de sangre, con Western blot indeterminados persistentes que tenían un bajo riesgo de infección por HIV no han observado indicios de infección por HIV-1 o HIV-2. Los pacientes con ELISA repetidamente reactivo y un Western blot indeterminado necesitan seguimiento serológico y clínico para determinar si se presenta una infección por HIV. No existe ningún patrón claro de reactividad antigénica que prediga con Western blot indeterminados. Pueden estar indicadas otras pruebas para la infección por HIV que utilizan métodos de PCR o cultivos, según el cuadro clínico y de los factores de riesgo para la infección por HIV.

Ensayos para la detección directa de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana

Actualmente, no existe ningún ensayo aprobado por la Fdo and Drug Administration (FAD) para la detección directa del HIV en un contexto clínico. Sin embargo, hay situaciones en las cuales los ensayos serológicos para la infección por HIV no son lo suficientemente sensibles ni especificas como diagnosticar confiablemente la infección por HIV. En estos casos, muchos médicos utilizan uno o más ensayos para la detección directa de proteínas o ácidos nucleicos virales. Es importante que el médico se familiarice con los métodos utilizados por el laboratorio que realiza la prueba y que interprete los resultados de los ensayos en el contexto del estado clínico y el riesgo de infección del paciente, porque estas pruebas no están aprobadas por la FDA para el diagnóstico de HIV y porque no todos los ensayos están estandarizados. En condiciones ideales, la infección por HIV debe ser confirmada utilizando más de un tipo de ensayo.

Detección de antígeno p24

La detección del antígeno de la cápside p24 se realiza utilizando ELISA. Los ELISA para antígeno p24 se basan en el principio de la captura de antígenos en fase sólida, en la cual los anticuerpos anti-p24 monoclonales o policlonales inmovilizados se unen al antígeno presente en la muestra de prueba. El antígenop24 se detecta a través de la fijación de IgG anti-HIV ligada a la enzima, seguido por un ensayo colorimétrico. La absorción, medida mediante espectrofotometría, es directamente proporcional a la concentración de antígeno. Los ensayos disponibles pueden detectar confiablemente más de 10 pg/ml de antígeno p24. Existen modificaciones del ensayo de antígeno p24 que detectan antígeno p24 en inmunocomplejos; estos ensayos tienen una sensibilidad aproximadamente dos veces mayor para detectar HIV que los ensayos estándar para antígeno p24.
El antígeno p24 puede ser detectado en suero o plasma durante la fase aguda de la infección por HIV primaria durante los estudios sintomáticos tardíos de la infección. Sólo el 4% de los adultos asintomáticos infectados por HIV tienen antígeno p24 detectable . Esta proporción se eleva al 70% en pacientes con SIDA avanzado. También se puede utilizar la detección del antígeno p24 para diagnosticar una infección por HIV en los lactantes nacidos de madres HIV-positivas. La sensibilidad global de la prueba del antígeno p24 para detectar la infección en lactantes es del 50 al 75% y la especificidad es mayor del 95%. La sensibilidad del ensayo disminuye en los niños asintomáticos y en los niños menores de 6 meses de edad, y varía del 0 al 20% en el primer mes de vida. Los niños que son positivos en antígeno p24 es más probable que progresen clínicamente.
La cuantificación del antígeno p24 era utilizada en el pasado para demostrar respuestas a los agentes antirretrovirales; sin embargo, este ensayo ha sido reemplazo por los ensayos de RT-PCR cuantitativos para RNA de HIV en plasma. Aunque los ensayos de antígeno p24 son muy específicos para la infección por HIV, son relativamente poco sensibles comparados con los ensayos de PCR para los ácidos nucleicos virales, y un resultado negativo del antígeno p24 no descarta la infección por HIV. La detección de antígeno p24 también se utiliza comúnmente para detectar replicación viral en sobrenadantes de cultivo; este método de detección del HIV se analiza con mayor detalle mas adelante.

Detección y cuantificación de ácidos nucleicos

Detección del DNA proviral

Se puede lograr una detección sumamente sensible de DNA proviral utilizando la PCR, se comprende la amplificación enzimática de un segmento de DNA utilizando cebadores de oligonucleótidos específicos. Se comercializa un equipo para amplificar un segmento corto de la región gag del HIV-1 (ensayo Amplicor Roche Molecular System), aunque actualmente no está aprobado por la FDA para este propósito. Este ensayo se realiza normalmente sobre células mononucleares en sangre periférica (CMSP) aisladas de sangre entera mediante una técnica de lisis. De particular importancia en los países en vía de desarrollo, este ensayo también parece eficaz cuando se realiza sobre muestras al acecho de sangre desecada.
La sensibilidad de ensayo Amplicor para detectar infección por HIV-1 establecida es mayor del 95% y la especificidad es superior al 98%. La sensibilidad para detectar infección por HIV-1 en lactantes menores de 2 años de edad varía del 75 al 97% en diferentes estudios. La sensibilidad de la PCR en los lactantes de 1 a 6 meses de edad es menor que en los niños mayores. Las causas de os resultados falsos negativos que se deben considerar incluyen errores en el rotulado, manipulación o el procesamiento de las muestras; variación de la secuencias en los sitios de fijación de los cebadores; y una baja cantidad de copias de DNA proviral. Los laboratorios que realizan las pruebas pueden utilizar sus propios ensayos de PCR para detectar el HIV-1; dichos ensayos pueden tener una sensibilidad y una especificidad diferentes para detectar el HIV-1 de las del ensayo Amplicor. Además algunos estudios que utilizaron paneles "cegados" estandarizados han demostrado variabilidad interlaboratorio y la necesidad de contar con programas que aseguren la calidad. Es posible en los ensayos de PCR que están optimizados para amplificar las cepas del grupo O. Se han desarrollado cebadores específicos de grupo O para este fin.

Detección y cuantificación de RNA del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 en plasma

Se comercializan varios ensayos diferentes para detectar y cuantificar el RNA de HIV en plasma. En la actualidad, se utilizan ampliamente tres ensayos; dos basados en el uso de amplificaciones enzimática de los ácidos nucleicos blanco (ensayo Amplicor Monitor Roche Molecular System y NASBA, Organon Technika) y el tercero utiliza la amplificación de señales de hibridación de DNA de cadena ramificada (DNA de cadena ramificada Chiron). El ensayo Amplicor Monitor es el único aprobado actualmente por la FDA para determinar el pronóstico para la infección por HIV-1.
Debido a su disponibilidad, la detección de RNA de HIV en plasma ha sido utilizado por algunos médicos para detectar infección por HIV en pacientes con infección por HIV aguda o aquellos con ELISA reactiva y Westerm blot indeterminados, aunque la prueba no está aprobada FDA para esta indicación. Este método parece ser muy sensible para detectar la infección en estas circunstancias, aunque se ha comunicado resultados falsos positivos, habitualmente con baja cantidad de copias. Se han informado que los ensayos de RT-PCR arrojan cantidades más bajas de copias de RNA en plasma que los ensayos de DNA de cadena ramificada en pacientes infectados por HIV no subtipo B, no ha sido estudiado sistemáticamente el impacto de esta menor sensibilidad sobre la capacidad para detectar una infección aguda por estos subtipos. La modificación de los cebadores de amplificación en el ensayo RT-PCR ha mejorado la sensibilidad de este ensayo para cuantificar infecciones producidas por subtipo no B.

Cultivo del virus de la inmunodeficiencia humana

El cultivo del HIV se puede practicar utilizando plasma o CMSP del paciente. Los cultivos de HIV en plasma pocas veces son positivos en la enfermedad asintomática, y en los cultivos de CMSP son utilizados más comúnmente para diagnosticar una infección por HIV. Se han utilizado varios sistemas de cultivo celulares y métodos diferentes para detectar la replicación del HIV. Los ensayos más utilizados para detectar HIV en muestras clínicas se basan en una metodología de consenso estandarizada en el AIDS Clinical Trials Group patrocinado por los Nacional Institutes of Health. Las CMSP del paciente son aisladas utilizando centrifugación por gradiente de densidad y son incubadas con CMSP estimuladas por fitohemaglutinina e interleucina-2 de un donante HIV-negativo. El cultivo simultáneo de las CMSP del paciente y el donante en presencia de interleucina-2 conduce a la producción de viriones de progenie a partir de las células infectadas. Se toman muestras semanales o bisemanales de los sobrenadantes del cultivo para determinar la producción de antígeno p24, utilizando un ensayo ELISA. Las CMSP del donante HIV-negativo se reponen una vez a la semana.
Un cultivo positivo de define como aquel en el cual existe una elevación sostenida en la producción de antígeno p24. La mayoría de los cultivos de pacientes HIV-positivo no tratados se tornan positivos dentro de las 3 primeras semanas de incubación. Los factores que pueden aumentar el tiempo hasta un cultivo positivo o reducir la frecuencia de cultivos positivos incluyen una carga viral baja de HIV (en los pacientes que no progresa por mucho tiempo o como resultado de la supresión de la carga viral mediante el tratamiento antirretroviral), las bajas cantidades de CMSP de entrada y problemas con la cantidad de los reactivos o las condiciones de incubación. Además, factores que influyen en la reactividad de los ELISA para antígeno p24 también pueden producir cultivos falsos negativos. Asimismo, se puede detectar replicación viral en los cultivos celulares mediante el ensayo de la actividad de la transcriptasa inversa. En una comunicación, se sugirió que los ensayos de transcriptasa inversa pueden ser más sensibles que los ensayos de antígeno p24 para detectar replicación de aislados de HIV no subtipo B.
El cultivo de CMSP para HIV es un método altamente sensible, pero laborioso para detectar infección HIV en lactantes. En un estudio, la PCR del DNA fue equivalente al cultivo para detectar infección por HIV en los lactantes nacidos de madres infectadas por HIV y tal vez más sensibles que él. Los cultivos de CMSP para HIV son positivos sólo en el 50% de los neonatos infectados por HIV durante los primeros meses de vida. Por lo general, los lactantes con cultivos negativos de CMSP para HIV también son PCR negativos y se consideran que han sido infectados en una etapa tardía del embarazo o durante el parto, más que antes en el embarazo.

Infección primaria por el virus de la inmunodeficiencia humana

EL factor más importante para diagnosticar la infección primaria por HIV es mantener un alto índice de sospecha clínica. Se deben considerar firmemente las pruebas pasa infección por HIV en las personas sexualmente activas o los que consumen drogas ilegales con síndrome clínico compatible. Además, de debe considerar el diagnostico de infección primaria por HIV en los pacientes asintomáticos con pruebas serológicas indeterminadas para anticuerpos anti HIV.
Como es posible que los paciente con infección primaria por HIV no hayan generado aún una respuesta de anticuerpos, los ensayos ELISA y Westerm blot pueden ser negativos o indeterminados. El ensayo más sensible para detectar infección por HIV aguda es la prueba de RNA del HIV en plasma, aunque, en la actualidad, la prueba no está autorizada para indicaciones diagnósticas. Los pacientes con infección primarias por HIV tienen niveles altos de viremia (habitualmente de 10 a10 copias por mililitro de plasma). Es importante destacar que se puede obtener resultados falsos positivos de las pruebas de PCR para RNA en ausencia de infección por HIV, como mencionábamos antes. El diagnóstico de infección por HIV en plasma es inferior a 2.000 copias/ml. La PCR para detectar DNA proviral de HIV también es positiva en un alto porcentaje de personas con infección por HIV aguda. El antígeno p24 puede ser positivo pero es significativamente menos sensible que los ensayos de PCR de RNA para detectar DNA: por lo tanto, un ensayo de antígeno p24 negativo no descarta la infección por HIV primaria. Aunque es esencial la detección directa de proteínas o ácido nucleico del HIV aguda, se debe tener en mente que estos ensayos no están aprobados para esta indicación. Todos los pacientes con sospecha de infección primaria por HIV deben ser sometidos a estudios de seguimiento para confirmar la seroconversión: en la mayoría de los pacientes, esto ocurre de los 3 a 6 meses de la presentación.

¿Me hago la prueba?

¿Cómo se sabe si una persona está infectada?

Podemos saberlo mediante la prueba de los anticuerpos frente al virus VIH, un análisis de sangre en el que se buscan estos anticuerpos.
Nadie puede hacerte esta prueba sin informarte previamente y sin que tú lo autorices. Sólo tú, los profesionales sanitarios que te atienden, y las personas que tú decidas pueden conocer el resultado.Que una persona sea seropositiva no significa que tenga la enfermedad pero sí que tiene el virus en su cuerpo (excepto en recién nacidos), y que lo puede transmitir a otras personas.
La prueba es gratuita y puedes solicitarla en los centros sanitarios.

¿Cuándo es conveniente hacerse la prueba?

Cuando el sexo no es seguro
No sirven las recriminaciones. En lugar de culpabilizar al otro /a o a ti mismo /a, pregúntate cómo ocurrió y descubre cómo evitarlo la próxima vez. Las soluciones pueden ser más fáciles si lo hablas con tu pareja y /o tus amistades.

Es una buena razón para hacerse la prueba del VIH. Hay muchas personas que no saben que están infectadas y es imposible saberlo por su aspecto exterior, su forma de ser…

Cuando desees abandonar el uso del condón con tu pareja
El que hayáis usado siempre condón con esta pareja, no demuestra que seáis seronegativos.

El virus no distingue el grado de afecto en las relaciones; es importante que los dos os hagáis la prueba del VIH y toméis decisiones sobre el condón en función de los resultados.

Si no estás infectado /a y tampoco tu pareja, podéis plantearos no usar condón en vuestra relación ¡pero sólo en esa!. Es imprescindible ponerse de acuerdo en cómo actuar si hubiera otros “ligues” y en qué hacer cuando el sexo con otras parejas no sea seguro. Puede ser difícil, pero es falso aquello de que “de lo que no se habla no existe”.

Cuando hayas compartido jeringuillas
Si desconoces el riesgo que hayas podido correr, consulta con profesionales sanitarios. En principio estaría indicado hacerte la prueba.

Ventajas de hacerse la prueba del VIH

Es la única forma fiable de saber si una persona está infectada o no, si ha llevado a cabo prácticas de riesgo.Hacerse la prueba del VIH puede ser una situación estresante, y podemos encontrar muchos motivos para evitarla……Pero conocer tu situación puede ayudarte a tomar decisiones importantes:Tras superar el periodo de ventana - el tiempo que se precisa desde que una persona se infecta por el VIH hasta que sus defensas producen suficientes anticuerpos para que sean detectados mediante pruebas médicas-:

Si el resultado es “seronegativo”...

Te tranquilizará saber que no te has infectado, ni has infectado a nadie.
Tendrás la oportunidad de reducir el riesgo que hasta ahora asumías: no estás inmunizado, una sola práctica de riesgo puede ser suficiente para infectarse.
Si tu pareja también es seronegativa, podréis elegir si usar condón o no.

Si el resultado es “seropositivo”...

No vivir con la incertidumbre puede aliviarte y si te sientes con buena salud, será más fácil afrontar la nueva situación.
Podrás decidir sobre tu vida sexual, protegerte de otras infecciones de transmisión sexual (ITS) y evitar infectar a otras personas.
Tendrás la oportunidad de cuidarte mejor: valorar tu alimentación, la actividad física y el descanso, el consumo de tabaco, alcohol, otras drogas…
Podrás organizar tu vida para intentar lo que deseas.
Podrás controlar periódicamente tus defensas y cómo evoluciona el virus en tu organismo (carga viral). Esto te permitirá tomar el tratamiento antes de que aparezcan problemas serios (infecciones oportunistas) que hagan más difícil y complicado controlar tu infección por VIH. Los nuevos tratamientos alargan y mejoran la calidad de vida. Ya no tiene sentido que muchas personas no conozcan su seropositividad hasta que desarrollen alguna enfermedad oportunista. No olvides que, también con una carga viral “indetectable”, se puede transmitir la enfermedad a otras personas.
Podrás contactar con otras personas seropositivas, en distintas ONGs, que te pueden orientar y ayudar desde su experiencia.
Si tu pareja también es seropositiva, tendréis que decidir el grado de riesgo que estáis dispuestos a asumir y valorar la posibilidad de practicar sexo seguro, aunque no hay evidencia científica sólida sobre la existencia de las reinfecciones.